Slide 1 : Dra Cecilia M. Galosi
Profesor Cátedra de Virología
Investigador Independiente
Comisión de Investigaciones Científicas Pcia de Bs As HERPESVIRUS EQUINO 1
SITUACION EN LA REPUBLICA ARGENTINA
Slide 2 : Herpesvirus equino 1 (EHV-1) virus del aborto equino
Herpesvirus equino 4 (EHV-4) rinoneumonitis equina HERPESVIRUS EQUINOS
“Aborto viral, Rinoneumonitis” Familia Herpesviridae
Subfamilia Alfaherpesvirinae
Género Varicellovirus
Slide 3 : El EHV-1 es el principal agente productor de signos respiratorios, nerviosos, muerte embrionaria, abortos y síndrome neonatal en equinos. El EHV-4 es el principal agente productor de signos respiratorios.
Pocos registros de aislamiento de EHV-4 a partir de abortos.
Slide 4 :
Slide 5 : Distribución mundial. Cepas endémicas
y de alta morbilidad
Afecta a todos los équidos
La mayoría de los animales se
infectan en los primeros 2 años de vida
Transmisión por contacto directo con animales
infectados, inhalación, saliva, descargas nasales, fomites,
alimento-agua contaminados, fetos abortados, placentas Herpesvirus equino 1 y 4
Slide 6 : Herpesvirus equino 1 y 4 (LATENCIA)
Slide 7 : ENFERMEDAD RESPIRATORIA
Puerta de entrada: aerógena
Período de incubación: 2 a 10 días
Signos clínicos: fiebre (39-42°C )
1º : replicación en epitelio nasal
2º: viremia
Leucopenia,Inapetencia, depresión,
* Descarga nasal serosa, faringitis
Tos y ocasionalmente infarto de
ganglios linfáticos retrofaríngeos y mandibulares
* Alta morbilidad en potrillos al destete.
* Adultos asintomáticos
Slide 8 : PATOGENIA
Slide 9 : Viremia Natimortos, abortos
muertes perinatales Mieloencefalopatía SNC Utero preñado
Placenta Infección de células endoteliales vasculares
Vasculitis y trombosis
Disminución del flujo sanguíneo en áreas afectadas
Mecanismos inmunológicos implicados en el daño tisular
Slide 10 : ABORTO EHV-1: si, aborto epizoótico “tormenta de abortos”, casos aislados por reactivación de virus latente
EHV-4: poco frecuente, esporádico
Ocurre 2 a 16 semanas después de la exposición
Entre los 7 y 11 meses de gestación
No hay signos premonitorios en la yegua, no deja secuelas.
No se repite en gestaciones sucesivas
Lesiones en el feto abortado: ictericia, petequias,
edema subcutaneo y pulmonar, esplenomegalia
focos necróticos blanquecinos en hígado.
EHV-1 puede producir abortos de fetos virológicamente negativos
Slide 11 : Blancos celulares: células endoteliales, epiteliales y leucocitos Allen et al. 2004
Slide 12 : Ocurre cuando la infección fetal se produce muy cerca de la fecha de parto
El potrillo nace débil, con ictericia y problemas respiratorios, depresión general y muerte por neumonitis fulminante antes de los 8 días ENFERMEDAD NEONATAL
Slide 13 : EHV-1: sí, ciertas cepas
EHV4: no registrada
Asociada a “tormentas de abortos” o a
brotes de enfermedad respiratoria en machos.
Síntomas: Incoordinación, ataxia, parálisis posterior y/o
anterior, decúbito, incontinencia urinaria y en casos graves
(raros) evoluciona a cuadriplejía y muerte.
En general no deja secuelas. www.neurovideos.vet.cornell.edu/Video.aspx?vid=11-12 SINDROME NEUROLOGICO
Slide 14 : Sangre
entera Enfermedad
respiratoria o neurológica Aislamiento
viral Abortos SN IFI Hisopados nasofaríngeos EHV: diagnóstico virológico cultivos
celulares
RK 13
RFE Suero de la yegua Manifestacion
clinica Suero Órganos fetales:
Pulmón
Hígado
Timo Leucocitos Muestra
a remitir Test
diagnostico Identificación
viral SN Aislamiento
viral IFI cultivos
celulares
RK 13
RFE PCR
Slide 15 : DIAGNOSTICO
Slide 16 : TIEMPO DE LA TOMA DE LA MUESTRA
(RELACIONADO AL PERIODO DE LA ENFERMEDAD)
Slide 17 : Incubación Cuadro clínico Convalescencia
Slide 18 : En el mercado
Vacunas a virus inactivado *
Vacunas que contienen EHV-1 + EHV-4 inactivadas
Vacunas a subunidades
(contienen glicoproteinas inmunodominantes)
Vacunas a virus atenuados
Experimentales
Vacunas recombinantes
Baculovirus / Levaduras
Vacunas a gen deleteado
Nuevos adyuvantes VACUNAS
Slide 19 :
Slide 20 : Transmisión Terciaria
(hacia otros establecimientos) Restringir el movimiento desde y hacia
el establecimientos afectado Aislar el animal infectado Subdividir las yeguas en grupos pequeños y aislados Estrategias de prevención de brotes Reactivación Viral
(infección endógena) Medidas de Control de Brotes Vacunación Establecer barreras sanitarias Colocar en cuarentena a los animales expuestos Revacunar animales no expuestos Transmisión secundaria
(a equinos de otros grupos) Transmisión primaria
(a equinos dentro del mismo grupo) Escape viral desde el reservorio
(excreción nasal) Reducción del estres EHV-1 Reservorio
(equino latentemente infectado) Allen et al. 2004
Slide 21 : Manejo y profilaxis para la prevención
de abortos epizoóticos Separar las yeguas preñadas en pequeños grupos según tiempo de gestación y mantener cada grupo como una unidad cerrada hasta que todas las yeguas hayan parido.
Aislar a los animales nuevos por lo menos durante 21 días
No mezclar yeguas con su primer potrillo con yeguas “viejas”
Si por alguna razón una yegua preñada ha estado afuera, no reintroducirla al grupo original.
Mantener a todas las yeguas preñadas bajo estricto programa de vacunación
Las yeguas preñadas deben mantenerse completamente separadas de otros equinos
Si se introducen yeguas “nodrizas” no deben entrar en contacto con las yeguas preñadas
Evitar condiciones estresantes (viajes prolongados, cambios “sociales” en el grupo) sobre todo en la gestación avanzada, la reactivación de virus latente podría resultar en la infección fetal y en la eliminación de virus por vías respiratorias. Allen et al. 2004
Slide 22 : Remitir material al laboratorio inmediatamente
Si el feto abortado es encontrado en un box, la cama debe rociarse con desinfectantes fenólicos o iodóforos e incinerarse. El box debe ser higienizado y desinfectado exaustivamente.
La yegua abortada debe ser higienizada y colocada en aislamiento hasta obtener el resultado de laboratorio.
El grupo de yeguas en contacto debe permanecer inalterado hasta conocerse el resultado del laboratorio.
Si el aborto fue producido por EHV-1
La yegua no deberá entrar en contacto con yeguas preñadas por lo menos por 2 meses y para ser servida deberá esperarse el 2do celo post-aborto.
El grupo de yeguas en contacto debe subdividirse en grupos mas pequeños, tanto como las instalaciones lo permitan
El movimiento de equinos desde y hacia el establecimiento debe interrumpirse hasta transcurridos 21 días del último aborto.
Deben implementarse estrictas medidas de higiene (diferente personal, limpieza, desinfección, manejo de los fetos abortados evitando la diseminación de la infección). Medidas de manejo en caso de un brote de abortos Allen et al. 2004
Slide 23 : Genes relacionados a la virulencia Vacunación eficiente ASPECTOS A RESOLVER Patogenia
del
aborto
Slide 24 : Genes relacionados a la virulencia QUE ESTAMOS HACIENDO
EHV-1 en Argentina : EHV-1 en Argentina
EHV-1 en Argentina : EHV-1 en Argentina
EHV-1 en Argentina : EHV-1 en Argentina
EHV-1 en Argentina : ESTUDIOS MOLECULARES DEL GEN CODIFICANTE DE LA GLICOPROTEINA C (gC) DEL PRIMER AISLAMIENTO ARGENTINO DE HERPESVIRUS EQUINO 1 (EHV-1) GALOSI CM1,4; MARTINEZ JP4; SGUAZZA GH3,4; FERNANDEZ LC4; TIZZANO MA4; ETCHEVERRIGARAY ME4; PECORARO MR2,4
Investigador de la 1Comisión de Investigaciones Científicas Pcia. Bs. As. y 2CONICET, 3Becario de la UNLP, 4Cátedra de Virología, Facultad de Ciencias Veterinarias, UNLP, 60 y 118, 1900 La Plata. cmgalosi@fcv.unlp.edu.ar EHV-1 en Argentina
Slide 29 : Patrones de restricción de ADN. M: marcador de peso molecular. 1: EHV-1 cepa HH1; 2: EHV-1 cepa SP/79. Las barras indican la variabilidad entre las cepas
EHV-1 en Argentina : A BamHI genoma 1P B BamHI genoma 1B
C Bgl II genoma 1B D Bgl II genoma 1P EHV-1 en Argentina
EHV-1 en Argentina : EHV-1 en Argentina
Slide 32 : Variante no neuropatogénica A2254 Mutación puntual de la base A (adenina) por G (guanina) en el segmento genómico que codifica para la DNA polimerasa Aumenta
la patogenicidad Mayores niveles y duración de viremia Variante
Neuropatogénica G2254 Aumento en la capacidad replicativa del virus
EHV-1 en Argentina : Está presente en el país desde, por lo menos, el año 1996.
10% (n=8/84)
Está significativamente (p=0.0045)
asociado con la manifestación clínica de enfermedad neurológica. EHV-1 en Argentina
Slide 34 : QUE ESTAMOS HACIENDO Patogenia
del
aborto
Slide 35 : Hospedador natural:
EHV-1 endémico en la población
Experimentos trabajosos
Costo elevado
Difícil manejo, estandarización del condiciones ambientales
Variabilidad genética
Poca disponibilidad en el mercado de reactivos (para IHQ, marcadores moleculares, etc.)
Slide 36 : MODELO MURINO Repite los signos clínicos respiratorios, neurológicos y los trastornos reproductivos El virus realiza viremia y establece latencia Reactivación inducida experimentalmente Existen similitudes en los mecanismos que intervienen
en la inmunología de la gestación comparado con el
equino (reclutamiento de células y expresión de citocinas)
EHV-1 en Argentina : EHV-1 en Argentina
EHV-1 en Argentina : EHV-1 en Argentina
Slide 39 : EHV placenta 1.Se observa inmunomarcación positiva frente a EVH1 en el núcleo y citoplasma de las células del trofoblasto en un corte de placenta de un animal infectado con 9 días de preñez. 40X EHV útero. Infiltrado inflamatorio en el miometrio de la región del útero no ocupado por embriones en un corte de placenta de un animal infectado con 9 días de preñez. 40X FINANCIADO POR LA AAVE TESIS DOCTORAL
Martín Ocampos GP
Slide 40 : Los estudios sobre la patogenia del aborto en yeguas se han realizado principalmente con el empleo de cepas de gran virulencia y altamente endoteliotrópicas y se han enfocado en las alteraciones vasculares ¿Existen otros mecanismos involucrados en el aborto por el EHV-1?
Slide 41 : Respuesta imune materna
Slide 42 : SISTEMA INMUNE Y PREÑEZ Células trofoblásticas Linfocitos
LTh1 (Il2,6,TNF), LTh2 (4,5,9,10,13,TGF),
LTh17,
LTh3,
LTreg Células Natural Killers uterinas (uNK): TNF-α, IL-10, IL-1β, TGF-β1, LIF IFN-γ Células dendríticas Macrófagos
Slide 43 : En los focos de infección por EHV-1, tanto en la placenta equina como en la murina, se desarrolla un notorio proceso inflamatorio e infiltración diferencial de células inmunitarias, que podrían diferenciarse en cambios en el perfil de citocinas. Se desconoce si la interrupción de la gestación por EHV-1 se debe a la respuesta inmunológica contra el virus a nivel placentario Los carbohidratos expresados en la superficie celular son importantes para la implantación y mantenimiento de la preñez
Alteraciones en el patrón de carbohidratos ocurren durante ciertos procesos infecciosos, inflamatorios e inmunológicos
Slide 44 : Existen distintos mecanismos patogénicos de aborto (cambios en la inmunidad sistémica y local, alteraciones vasculares y en los procesos de proliferación, diferenciación y muerte celular) que dependen de las cepas de EHV-1
La infección genera un incremento de algunas poblaciones celulares relacionado con la respuesta inmune uterina y modifica el perfil de citoquinas uterinas hacia aquél que interrumpe la preñez Hipótesis EHV-1 tiene la capacidad de bloquear in vitro la apoptosis en la células que infecta, a partir de interferir con la activación de la proteína caspasa 3
En los pulmones de ratones BALB/c infectados experimentalmente,
la tasa de apoptosis de células no infectadas es mayor que la tasa de apoptosis en las células infectadas
Slide 45 :
Slide 46 : QUE ESTAMOS HACIENDO Vacunación eficiente
Slide 47 : QUE CONDICIONES DEBERIA REUNIR LA VACUNA Prevenir la infección
Prevenir el establecimiento en latencia
Prevenir la viremia
Impedir la reactivación
Slide 48 :
Slide 49 : gD-Bac
Slide 50 :
Slide 51 : La inmunización por vía IN con gD-Bac de EHV-1 induce la producción de IgA específica a nivel de la mucosa del tracto respiratorio superior.
La inmunización combinada IN y SC o IM podría resultar efectiva
La inmunización combinada podría prevenir además el establecimiento de la latencia
Slide 52 : Especial agradecimiento a la Dra M Barrandeguy por facilitarme imágenes y parte del material aquí presentado.
Slide 53 :